2010X1118），混勻細(xì)胞。
 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復(fù) 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

 
情況 B：血液樣本量大于等于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：
 

• 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，依次小心加入分離液 1 及分離液 2（分離液 1 與分離液 2 比例 2：1）,試劑總量與稀釋后的樣本量相等。

 

• 將血液樣本小心加于分離液之液面上，550-750g（最大離心力可至 1000g），離心 20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心

 
時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到最佳分離效果。加入血液樣本后，樣本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二）。
 

• 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 10。

 
分離圖例
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項(xiàng)】
 

• 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

 

• 本實(shí)驗(yàn)最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離心

 
 
管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)
 
變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。
 

• 分離液用量大于血液樣本時(shí)，分離效果更佳。

 

• 血液樣本不需稀釋，直接進(jìn)行分離即可。

 

• 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助，具體聯(lián)系方式詳見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。

 
【儲(chǔ)存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
 

	紅細(xì)胞		白細(xì)胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
含量（個(gè)/L）	（4.0-5.5）×1012	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞	單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×1011
		50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

 

• 所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

 

• 所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

 

• 所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

 
D.PCR 技術(shù)
 
【可能存在的問(wèn)題及解決方法】
 
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：
 

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因		建議解決方案
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短		適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過(guò)大		調(diào)整細(xì)胞密度

 

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過(guò)小

 

• 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

 

• 本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可

 
能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
 
注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到最佳分離效果，
 
離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。